肿瘤学论文_SIRT3去SUMO化修饰调节乳腺癌细胞M

来源:上海交通大学学报 【在线投稿】 栏目:期刊导读 时间:2021-09-24
作者:网站采编
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摘要:文章摘要:目的·研究沉默调节蛋白3 (sirtuin 3, SIRT3)去SUMO化修饰对乳腺癌细胞的增殖和耐药性的影响。方法·用CRISPRCas9质粒pX330-sgRNA敲除MCF7乳腺癌细胞系SIRT3基因,构建SIRT3KO的MCF7细胞

文章摘要:目的·研究沉默调节蛋白3 (sirtuin 3, SIRT3)去SUMO化修饰对乳腺癌细胞的增殖和耐药性的影响。方法·用CRISPRCas9质粒pX330-sgRNA敲除MCF7乳腺癌细胞系SIRT3基因,构建SIRT3KO的MCF7细胞系;在此细胞系基础上,利用表达SIRT3K288R (SUMO化修饰位点突变型)和SIRT3 WT (野生型)的反转录病毒,以及空载对照(Vector)病毒进行感染,以构建SIRT3SUMO化修饰位点突变的细胞系及其对照细胞系。3种细胞株在相同条件下培养后进行细胞计数并在显微镜下进行观察,确定细胞数量和形态的变化;用不同浓度的阿霉素分别处理细胞24、48、72 h,检测3种细胞株的耐药程度。结果·成功构建了敲除SIRT3的MCF7细胞系,并利用反转录病毒感染构建了表达SIRT3 K288R和SIRT3 WT以及空载对照的细胞系;通过细胞计数发现,在相同培养时间下,SIRT3 K288R细胞系的增殖速率显著低于SIRT3 WT和Vector细胞系(P=0.000);在显微镜下测量非黏附性乳腺球群细胞的大小,发现SIRT3 K288R细胞系的直径较SIRT3 WT和Vector细胞系小,增殖缓慢。阿霉素耐药实验结果显示,在细胞培养24、48和72 h时,不同阿霉素浓度(1.25、2.5、5和10μg/mL)处理下的SIRT3 K288R细胞株的活性均显著高于SIRT3 WT和Vector细胞系(均P<0.05);并且相比另外2个细胞系,阿霉素在SIRT3 K288R细胞系中的半数抑制浓度(IC50)也较高。结论·去SUMO化修饰的SIRT3能抑制乳腺癌细胞MCF7的增殖,但增加其对阿霉素的耐药性。

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项目基金:《上海交通大学学报》 网址: http://www.shjtdxxb.cn/qikandaodu/2021/0924/916.html



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